热敏性寡聚物-酶结合物的非凡性质

通过将热敏性寡聚物聚( N -异丙基丙烯酰胺 )聚合物与胰蛋白酶结合，制备了可逆的可溶-不溶寡聚物-酶结合物。这些结合物可以在溶液中催化酶反应，然后通过热沉淀从溶液中分离出来。该结合物的一个特殊特征是，每个聚(NIPAAm)链仅与酶有一个端点结合，因此因立体障碍而导致的酶活性损失应被最小化。制备了每个胰蛋白酶分子拥有不同数量的寡聚物链的结合物。令人惊讶的是，结合物的酶活性随着与天然胰蛋白酶的寡聚物结合增加而增加。结合物中的胰蛋白酶活性位点能够接触到大分子，如大豆胰蛋白酶抑制剂（分子量 = 21,500）。与天然胰蛋白酶相比，酶结合物在溶液中和沉淀相中均更为稳定。另一方面，当温度反复循环通过聚(NIPAAm)的下临界溶液温度(LCST)时，结合物的酶活性损失速度快于天然胰蛋白酶。在每个循环中，结合物通过热沉淀的回收率超过95%，即使经过14个周期的LCST。