在零个、一个和两个完整的二硫键情况下，核糖核酸酶 T1 的构象稳定性和活性。

核糖核酸酶 T1 具有两个二硫键，将半胱氨酸残基 2-10 和 6-103 连接在一起。我们制备了一种核糖核酸酶 T1 的衍生物，其中一个二硫键断裂且半胱氨酸残基经过羧基甲基化处理，即 (2-10)-RCM-T1，以及三种衍生物，均为两个二硫键断裂且半胱氨酸残基经历了还原，R-T1，羧基酰胺甲基化，RCAM-T1，或羧基甲基化，RCM-T1。这些蛋白质的 RNA 水解活性已被测量，并且使用尿素和热变性研究来确定其构象稳定性。蛋白质的活性、熔解温度和构象稳定性如下：核糖核酸酶 T1 (100%，59.3 摄氏度，10.2 千卡/摩尔)，(2-10)-RCM-T1 (86%，53.3 摄氏度，6.8 千卡/摩尔)，R-T1 (53%，27.2 摄氏度，3.0 千卡/摩尔)，RCAM-T1 (43%，21.2 摄氏度，1.5 千卡/摩尔)，以及 RCM-T1 (35%，16.6 摄氏度，0.9 千卡/摩尔)。因此，当一个二硫键断裂时，构象稳定性下降了 3.4 千卡/摩尔，而当两个二硫键均断裂时下降了 7.2-9.3 千卡/摩尔。令人惊讶的是，RNase T1 能够在两个二硫键断裂及半胱氨酸残基羧基甲基化的情况下折叠和功能。稳定性的大幅降低主要是由于蛋白质未折叠状态的构象熵增加，这种情况是在去掉二硫键对灵活性的约束后发生的。我们提出了一个用于预测交联对蛋白质构象熵影响的新方程：delta Sconf = -2.1 - (3/2)R 1n n，其中 n 是交联的侧链之间的残基数。该方程与实验结果的吻合度远远优于先前使用的其他方程形式。