与鼠疫耶尔森菌的色素表型相关的卟啉贮存位点的鉴定与克隆

外源性卟啉或刚果红的温度依赖性吸收形成耶尔森菌的色素菌落被称为色素表型（Pgm+）。自发突变为Pgm-表型导致多种不同生理特征的丧失，包括在26摄氏度下储存卟啉和结合刚果红的能力。在本研究中，我们生成并分离了卟啉储存阴性（Hms-）的转座子插入突变体，因此无法形成色素菌落。这些突变源于染色体DNA中19.5千碱基（kb）SalI片段内的单个mini-kan插入体。对八个突变体的限制位点分析确定了至少六个可能不同的插入位点，跨越了大约10-kb的卟啉储存（hms）位点。19.5-kb的SalI片段（含约18 kb的Y. pestis DNA及mini-kan插入）是从其中一个突变体KIM6-2012中克隆得到的。通过使用该克隆片段作为DNA探针，自发突变为Pgm-表型的机制被确定为大规模缺失事件。这一缺失至少跨越了九个不同Y. pestis菌株中的18 kb基因组DNA。邻近mini-kan插入的DNA被用来识别一个含有野生型hms位点的克隆。含有该克隆的Y pestis KIM的自发Pgm-突变体表现出Hms+表型。本研究中生成的hms::mini-kan突变和克隆的野生型hms位点将极大地帮助识别卟啉储存的功能。