在凋亡过程中半胱天冬酶-3介导的聚（ADP-核糖）酶的加工

聚（ADP-核糖）羟化酶（PARG）负责水解由聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP-1）和其他PARP-1类酶合成的聚（ADP-核糖）。在这项工作中，我们报告了在依托泊苷、斯托洛斯普林和Fas诱导的人细胞凋亡过程中PARG被切割。这一切割与PARP-1的加工同时发生，产生两个C末端片段，分别为85和74 kDa。使用凋亡细胞提取物的体外切割实验表明，一种半胱天冬酶家族的蛋白酶负责PARG的加工。在纳摩尔浓度的半胱天冬酶抑制剂乙酰-Asp-Glu-Val-Asp-aldehyde下，该切割完全被抑制，这表明半胱天冬酶-3样蛋白酶的参与。与此一致，重组半胱天冬酶-3在体外有效地切割PARG，这表明这种蛋白酶在体内PARG加工中的作用。此外，缺乏半胱天冬酶-3的MCF-7细胞在斯托洛斯普林处理后没有显示任何PARG切割。通过定点突变分析识别的切割位点为DEID(256)向下箭头V和非常规位点MDVD(307)向下箭头N。动力学研究表明全长PARG及其凋亡片段具有相似的最大速度（V(max)）和亲和力（K(m)），这表明半胱天冬酶-3可能影响PARG功能而不改变其酶活性。在凋亡过程中半胱天冬酶对PARP-1和PARG的早期切割提示聚（ADP-核糖）代谢调节在细胞死亡过程中的重要功能。