酵母中的剪接体组装.

mRNA的前体通过组装成一个复杂的多亚基结构——剪接体，成为剪接的底物。为了研究酵母剪接体的组装，通过在非变性聚丙烯酰胺胶上电泳分离了中间复合物。观察到了四种依赖于剪接的复合物，A1、A2-1、A2-2和B。这些复合物的组装顺序被确定为 B----A2-1----A1----A2-2。通过添加5 mM EDTA或在热失活的rna2提取物中进行组装过程，可以阻止在复合物A1处的组装过程。通过与五种酵母snRNA探针的杂交，确定了复合物的snRNA组成。snR14 (U4)仅在复合物A2-1中发现，snR6 (U6)和snR7 (U5)在复合物A1、A2-1和A2-2中存在，而snR20 (U2)在所有四个复合物中都有。snR19 (U1)未出现在任何复合物中。还使用这些探针的杂交来检测酵母剪接提取物中存在的snRNP。我们发现snR6、snR7和snR14共同存在于一个大的复合物中。该复合物经历了ATP依赖的解离，生成snR7和snR6-snR14复合物。snR19和snR20存在于不同的RNP中，但ATP并不影响它们的迁移率。提出了剪接体组装的机制.