青霉草花叶病毒RNA复制蛋白1a和2a共定位，且1a独立定位于酵母内质网

正链RNA病毒RNA复制复合物的普遍膜连接与其功能相关，但不同病毒所使用的细胞内膜各不相同。青霉草花叶病毒（BMV）编码两种相互作用的RNA复制蛋白：1a，它包含RNA封端和类解旋酶结构域，以及聚合酶样的2a蛋白。在BMV的自然植物宿主细胞中，1a和2a在内质网上共定位。1a和2a还在酵母Saccharomyces cerevisiae中引导BMV RNA复制和亚基因mRNA合成，但1a、2a以及活性复制复合物在酵母中的分布是否与植物细胞相同尚未确定。对于表达1a和2a并复制BMV基因组RNA3的酵母，我们使用双标记共聚焦免疫荧光法确定1a、2a和病毒RNA的定位，并探索复制复合物靶向的决定因素。与植物细胞一样，1a和2a在酵母内质网上共定位并被保留，且在高尔基体中未检测到明显的累积。1a和2a分布在大部分内质网表面，且在核周内质网上的累积最强。用溴标记的UTP进行体内标记显示，1a和2a的累积位点是新生病毒RNA合成的部位。在原位杂交显示，已完成的病毒RNA产物主要累积在复制复合物的邻近区域，但一些可能更成熟的细胞在远离复制复合物的周围细胞质中也积累了大量病毒RNA。此外，我们发现，在缺乏其他病毒因子的情况下，1a也能定位于内质网。这些结果表明，BMV在酵母中的RNA复制重复了复制复合物的正常定位，揭示了RNA复制产物的细胞内分布，并且表明1a至少部分负责RNA复制复合物的内质网定位和保留。