前体蛋白与叶绿体结合需要跨膜间隙中的核苷三磷酸。

蛋白质导入叶绿体是由前体蛋白与外膜表面之间的结合相互作用发起的。之前已显示该结合步骤依赖于能量（Olsen, L. J., Theg, S. M., Selman, B. R., 和 Keegstra, K. (1989) J. Biol. Chem. 264, 6724-6729）。我们利用了结合所需能量的广泛核苷酸特异性，以研究核苷三磷酸（NTP）需求的位置。GTP支持前体与叶绿体的结合。通过直接ATP测量确定，GTP并未转化为ATP，也未穿过内膜。因此，GTP支持从跨膜间隙或外膜外部的结合。为了区分跨膜间隙和外部NTP的需求，我们对叶绿体内部和外部的NTP水平进行了实验性操控。在外部膜不可渗透的ATP陷阱存在的情况下，内部生成的ATP能够支持结合。因此，鉴于GTP支持从跨膜间隙或叶绿体外部的结合，且ATP支持从跨膜间隙或基质的结合，我们得出结论，前体与叶绿体结合的NTP利用位置是在两个膜之间的跨膜间隙。