来自嗜热嗜酸芽孢杆菌的新型嗜热且耐高温的酯酶的过表达及其特性，序列与激素敏感脂肪酶亚家族相似

我们之前从嗜热嗜酸的真细菌嗜热嗜酸芽孢杆菌中纯化了一种新的酯酶，其N端序列对应于报告中与哺乳动物激素敏感脂肪酶（HSL）类似组的开放阅读框（ORF3）。为了比较该嗜热酶与HSL组同源的中温和冷温成员的生化特性，建立了大肠杆菌的过表达系统。在10 mg/l大肠杆菌培养中以可溶且活性形式表达的蛋白质被纯化至均一并进行了生化特征分析。该酶是一种34 kDa的单体蛋白，基于底物特异性和抑制剂的作用，被证明是B'-型羧基酯酶（EC 3.1.1.1）。在测试的p-硝基苯基 (PNP) 酯中，最佳底物为PNP-己酸酯，其Km和kcat值分别为11+/-2微摩尔（均值+/-标准差，n=3）和6610+/-880 s-1（均值+/-标准差，n=3），测试条件为70摄氏度和pH 7.1。尽管与哺乳动物HSLs的序列同一性相对较高，但冷温的Moraxella TA144脂肪酶2和人肝芳基乙酰酰胺去乙酰酶未检测到脂肪酶或酰胺酶活性。对一系列底物进行了对映选择性测试。只有在分离（+/-）-3-溴-5-(羟甲基)-Delta2-异噁唑啉时观察到了显著的对映选择性，其中(R)-产物以84%的对映体过量和36%的转换率获得。当在醋酸乙烯和甲苯中测试时，该酶也能合成乙酰酯。通过二乙基碳酸酯、二乙基-p-硝基苯基磷酸、二异丙基磷氟酸酯（DFP）和物理斯的明以及与3H-DFP标记的失活，支持了我们之前关于由Ser-His-Asp组成的催化三联体的建议。讨论了该酶的活性-稳定性-温度关系，与HSL组同源成员的关系。