鉴定α-半乳糖基神经酰胺作为iNKT细胞的哺乳动物内源性抗原

不变性自然杀伤T（iNKT）细胞是以CD1d限制性方式识别脂质抗原的非常规T细胞。在这些脂质抗原中，最初在海绵中鉴定出的α-半乳糖基神经酰胺（α-GalCer）是效力最强的抗原。尽管已有关于α-端基异构己糖基神经酰胺和微生物群来源的分枝α-GalCer存在的报道，但尚未在哺乳动物中鉴定出具有抗原活性的α-GalCer。在此，我们开发了一种高分辨率分离和检测系统——超临界流体色谱串联质谱（SFC/MS/MS），该系统能够区分己糖基神经酰胺非对映异构体（α-GalCer、α-GlcCer、β-GalCer或β-GlcCer）。B16黑色素瘤肿瘤细胞系无法激活iNKT细胞；然而，异位表达CD1d足以在不添加抗原的情况下激活iNKT细胞。B16黑色素瘤不大可能产生iNKT细胞抗原；相反，在细胞培养血清中检测到了抗原活性。基于活性的纯化和SFC/MS/MS鉴定出基于二氢鞘氨醇的饱和α-GalCer是血清、胆汁和淋巴组织中的抗原成分。这些结果首次证实了哺乳动物中存在具有强效抗原活性的α-GalCer。