在单光子和双光子激发下扫描总内反射荧光显微镜：图像形成

我们提出了一种新的总内反射荧光显微镜（TIRFM），称为扫描TIRFM（STIRFM），它使用聚焦环形光束照明和高数值孔径（NA = 1.65）物镜。STIRFM产生的渐逝场在横向上聚焦，产生一个小的激发体积，能够诱发非线性效应，如双光子吸收。实验图像显示了CdSe量子点纳米晶体和掺染罗丹明6G的微珠，表明在当前设置下实现了良好的横向和轴向分辨率。STIRFM几何产生的焦点的理论模拟显示，由于高数值孔径物镜的去极化效应，聚焦的渐逝场被分为两个峰。然而，单光子和双光子激发的点扩展函数分析表明，聚焦分裂效应的检测依赖于探测针孔的大小。针对针孔大小对图像形成的影响进行了理论研究，并用纳米晶体图像进行了实验验证。