一种快速且稳健的识别花序浸泡转化后拟南芥幼苗的方法

背景：将花序浸泡在农杆菌悬浮液中的花序浸泡转化方法是拟南芥转化的首选方法。标记的存在，通常是抗生素或除草剂抗性，可以让我们识别出转化的幼苗与未转化的幼苗。幼苗选择是一个漫长的过程，并不能总是以易于识别的转化体为结果。对卡那霉素、磷酸草铵膦和潮霉素B抗性的选择通常需要7-10天，而高幼苗密度和真菌污染可能导致无法回收转化体。结果：开发出了一种在短短3.25天内识别转化幼苗的方法。经过花序浸泡转化后获得的拟南芥T1种子植于含有1%琼脂的MS培养基和卡那霉素、磷酸草铵膦或潮霉素B的培养基上，具体取决于需要。在为期2天的层积期后，种子经历4-6小时光照、48小时黑暗及24小时光照的周期（3.25天）。抗卡那霉素和抗磷酸草铵膦的幼苗通过绿色展开的子叶与非抗性幼苗易于区分，而非抗性幼苗则具有苍白的未展开子叶。在潮霉素B培养的幼苗与在卡那霉素和磷酸草铵膦培养的幼苗有所不同，因为抗性和非抗性幼苗均呈绿色。然而，抗潮霉素B的幼苗易于识别，因为它们具有长的下胚轴（0.8-1.0厘米），而非抗性幼苗具有短的下胚轴（0.2-0.4厘米）。结论：这里提出的方法是对当前选择方法的改进，因为它可以更快速地识别转化幼苗：与当前选择协议所需的7-10天相比，转化幼苗在短短3.25天内即可轻易辨别与非转化体。