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La génération de domaines de liaison à l'ADN personnalisés ciblant des séquences uniques dans des génomes complexes est cruciale pour de nombreuses applications biotechnologiques. Le domaine de liaison à l'ADN récemment décrit des effecteurs de type activateur de transcription (TALE) de Xanthomonas est constitué d'une série de répétitions disposées en tandem, chaque répétition se liant à un nucléotide de la séquence cible. Nous présentons ici une stratégie d'ingénierie de protéines TALE dotées de nouvelles spécificités de liaison à l'ADN, basée sur le TALE AvrBs3 contenant 17,5 répétitions comme squelette. Pour chacune des 17 répétitions complètes, quatre types de modules ont été générés, chacun présentant une préférence de base distincte. À l'aide de cet ensemble de 68 modules de répétition, des domaines de reconnaissance pour toute séquence cible d'ADN de 17 nucléotides au choix peuvent être construits en assemblant les modules sélectionnés dans un ordre linéaire défini. L'assemblage est réalisé en deux étapes successives de clonage « one-pot » à l'aide de la méthode de clonage Golden Gate qui permet la fusion sans cicatrice de multiples fragments d'ADN. En appliquant cette stratégie, nous avons assemblé des TALE sur mesure avec de nouvelles spécificités cibles et testé leur fonction in vivo.
Weber et al. (Thu,) ont étudié cette question.