Carbapenemase-produzierende Bakterien, insbesondere solche, die die KPC-3-Variante exprimieren, stellen eine kritische globale Gesundheitsbedrohung dar, da sie gegen fast alle β-Laktam-Antibiotika, einschließlich Carbapeneme, resistent sind. Schnelle und zuverlässige Nachweiswerkzeuge sind dringend erforderlich, um die Infektionskontrolle zu verbessern und das Patientenmanagement zu leiten. Nanobodies (VHHs) stellen eine vielversprechende Alternative zu herkömmlichen Antikörpern dar, dank ihrer hohen Stabilität, geringen Größe und der Fähigkeit, kryptische Epitopen zuzugreifen. Hier berichten wir über die Erzeugung und Charakterisierung eines Nanobody, der gezielt KPC-3 anspricht. Eine Immun-VHH-Phagen-Display-Bibliothek wurde konstruiert, wobei über 90 % der Klone korrekt dimensionierte Einsätze enthielten. Nach drei Runden Biopanning wurden hochspezifische Binder durch ELISA-Screening identifiziert. Die Sequenzierung identifizierte einen Nanobody mit markanten VHH-Eigenschaften, der exprimiert und durch ELISA und Western Blot validiert wurde. Obwohl kinetische Assays keine Hemmung der enzymatischen Aktivität von KPC-3 zeigten, zeigte der Nanobody interessanterweise eine hochaffine Bindungserkennung sowohl von KPC-2 als auch von KPC-3 in periplasmatischen Extrakten klinischer Stämme. Strukturelle Modellierung unterstützte diese Ergebnisse weiter und hob günstige Interaktionsoberflächen hervor. Diese Studie liefert den ersten Beweis für einen gegen KPC-3 gerichteten Nanobody, der ein konserviertes Epitope erkennt, das von KPC-3 und KPC-2 geteilt wird, und unterstreicht seine vielversprechende Verwendung als molekulares Werkzeug zur Detektion von KPC-Varianten und zur Schaffung einer Basis für zukünftige Affinitätsreifung für therapeutische Anwendungen.
Hamdi et al. (Sat,) untersuchten diese Frage.