La microscopie à feuille optique fortement inclinée (HILO) est une technique optique qui utilise un faisceau laser fortement incliné pour réaliser une microscopie à fluorescence en champ large. Le volume d'illumination confiné permet un meilleur contraste par rapport à la microscopie épifluorescence standard, tout en conservant des capacités de balayage profond. Limiter la fluorescence de fond provenant des plans hors de la mise au point est particulièrement crucial dans des applications telles que la localisation de molécules uniques et l'imagerie super-résolue. Malgré son utilisation répandue, la littérature actuelle manque de rapports complets sur les véritables avantages de HILO dans ces types de microscopie. Ici, nous caractérisons en détail la propagation d'un faisceau fortement incliné à travers des échantillons marqués fluorescent et mettons en œuvre un façonnage approprié du faisceau pour améliorer la performance de cette technique en imagerie super-résolue. Nous démontrons qu'en réduisant la taille du faisceau le long de l'axe réfracté seulement, nous pouvons encore réduire le volume d'excitation et augmenter sensiblement le rapport signal-sur-fond des images tout en maintenant un champ de vision adapté à l'imagerie des cellules uniques. Nous appliquons ensuite notre méthode d'illumination à l'imagerie super-résolue dSTORM du cytosquelette de vimentine, et nous démontrons que l'augmentation du contraste de l'image permet un meilleur échantillonnage des molécules uniques et finalement une qualité d'images super-résolues supérieure.
T. et al. (Mon,) ont étudié cette question.