Un cofactor de metiltransferasa modificado para silenciar selectivamente la expresión génica en Escherichia coli

El control artificial de la expresión génica en bacterias ofrece perspectivas interesantes para influir en la patogenicidad bacteriana y la resistencia a los antibióticos. Mostramos que el cofactor de metiltransferasa, AdoHcy azida, puede silenciar la expresión génica en plásmidos modificados en algunas cepas de Escherichia coli, donde se deshabilitaron selectivamente e independientemente los genes de resistencia a la ampicilina y kanamicina, así como los genes de eGFP. La desactivación de la transcripción se debe probablemente a la inhibición estérica durante la iniciación de la transcripción, lo que es respaldado por resultados de secuenciación Sanger y de nanoporo. Ambos métodos de secuenciación mostraron que faltaban de 3 a 6 nucleótidos alrededor del sitio de modificación. Después del crecimiento, el plásmido extraído AmpR/eGFP muestra evidencia de restricción, con secciones del plásmido, incluido el sitio de modificación, ausentes en los plásmidos modificados con AdoHcy azida. Notablemente, la modificación con AdoHcy azida en el ADN parece ser resistente a la desmetilación en la cepa BL21 de E. coli.