Genklonierung, Reinigung und Charakterisierung von NfsB, einem minoren sauerstoffunempfindlichen Nitroreductase aus Escherichia coli, die in biochemischen Eigenschaften FRase I, der wichtigsten Flavinreduktase in Vibrio fischeri, ähnlich ist.

nfsB, das eine minoren sauerstoffunempfindliche Nitroreductase kodiert, wurde durch PCR isoliert, wobei Primer verwendet wurden, die zwei Aminosäuresequenzen entsprechen, die unter der wichtigsten Flavinreduktase von Vibrio fischeri und klassischen Nitroreductasen von Salmonella typhimurium und Enterobacter cloacae konserviert sind. Das Genprodukt, NfsB, wurde aus Extrakten von Escherichia coli-Zellen, die es überexprimieren, auf Homogenität gereinigt. NfsB wurde auf der E. coli-Karte bei 13 min lokalisiert. Biochemische Analysen zeigten, dass NfsB ein Polypeptid mit einem berechneten Molekulargewicht von 23.904 ist, das in der Lage ist, ein Homodimer zu bilden und eng mit FMN als prosthetische Gruppe assoziiert ist. Obwohl es eine geringere Affinität zum NfsB-Apoenzym als zu FMN zeigte, konnte FAD als effektiver Ersatz für FMN dienen. Es wurde auch gezeigt, dass NfsB eine breite Elektronenakzeptorspezifität aufweist und mit einem niedrigen Niveau der NAD(P)H-Flavin-Oxidoreduktase assoziiert ist. Die Katalyse von NfsB folgt dem Ping-Pong-Bi-Bi-Mechanismus. Der Km-Wert für NADH variierte je nach dem verwendeten zweiten Substrat.