VEGF erhöht die endotheliale Permeabilität über separate Signalwege, die ERK-1/2 und Stickstoffmonoxid einbeziehen

Wir haben die Hypothese getestet, dass VEGF die endotheliale Hyperpermeabilität gegenüber Makromolekülen durch Aktivierung des ERK-1/2 MAPK-Weges reguliert. Wir haben auch getestet, ob PKC und Stickstoffmonoxid (NO) die durch VEGF induzierten Erhöhungen der Permeabilität über den ERK-1/2-Weg vermitteln. Der FITC-Dextran 70-Fluss über menschliche Nabelvenenendothelzellenmonolayer diente als Indikator für die Permeabilität, während Western Blots die Phosphorylierung von ERK-1/2 bewerteten. Die durch VEGF induzierte Hyperpermeabilität wurde durch Antisense-DNA-Oligonukleotide, die gegen ERK-1/2 gerichtet sind, und durch Blockade der MEK- und Raf-1-Aktivitäten (20 µM PD-98059 und 5 µM GW-5074) gehemmt. Diese Blockierungsagenten reduzierten auch die ERK-1/2-Phosphorylierung. Der PKC-Hemmer Bisindolylmaleimid I (10 µM) blockierte sowohl die VEGF-induzierte ERK-1/2-Aktivierung als auch die Hyperpermeabilität. Der NO-Synthase (NOS)-Hemmer N(G)-Nitro-l-Arginin-Methylester (200 µM) und der NO-Fänger 2-Phenyl-4,4,5,5-Tetramethylimidazolin-1-oxyl-3-oxid (100 µM) hoben die VEGF-induzierte Hyperpermeabilität auf, blockierten jedoch nicht die ERK-1/2-Phosphorylierung. Diese Beobachtungen zeigen, dass die durch VEGF induzierte Hyperpermeabilität die Aktivierung von PKC und NOS sowie Raf-1, MEK und ERK-1/2 umfasst. Darüber hinaus legen unsere Daten nahe, dass ERK-1/2 und NOS Elemente verschiedener Signalwege bei der durch VEGF induzierten Hyperpermeabilität sind.