尽管具有强大的功能，CRISPR 激活（CRISPRa）筛选在原代人细胞中的应用仍是一项艰巨的挑战。在这里，我们开发了 dCas12f1-SAM，这是一种基于 SAM 的紧凑型转录激活平台，其在永生化细胞系以及原代人 T 细胞和造血干/祖细胞（HSPCs）中的表现均优于现有系统。利用 dCas12f1-SAM，我们在原代人 T 细胞中针对 1559 个人类转录因子（TFs）进行了混合 CRISPRa 筛选，并鉴定了 IL-2 表达的多个正向调控因子。我们进一步通过 miCROP-seq 构建体实施了单细胞 CRISPRa 筛选，解析了这些遗传扰动如何重塑 T 细胞激活动力学并驱动功能上不同的细胞状态。在排名前列的基因中，我们重点关注了 KLF12 和 LHX5，两者的过表达显著改善了嵌合抗原受体 T（CAR-T）细胞的抗原特异性反应。总的来说，这些发现确立了 dCas12f1-SAM 作为一种强效的转录激活工具，突显了其推动细胞工程和免疫治疗应用的潜力。
Cao et al. (Tue,) 对该问题进行了研究。