单 Cas9 切口酶诱导产生脱靶效应降低的 NRAMP1 敲入牛

背景：CRISPR-Cas9 系统是广泛用于多种物种转基因动物生产的平台，但其脱靶效应仍有待解决。该工具已在模式动物中提出了若干应用，但对于转基因家畜生产仍显不足。结果：在此，我们报告了首次应用单 Cas9 切口酶（Cas9n）诱导牛选定基因座处的基因插入。我们通过染色质免疫共沉淀测序（ChIP-seq）鉴定了牛胎儿成纤维细胞（BFFs）中催化失活 Cas9（dCas9）蛋白的主要结合位点。随后，我们证实单 Cas9n 诱导的单链断裂可以刺激天然抗性相关巨噬细胞蛋白-1（NRAMP1）基因的插入，且脱靶效应有所降低但仍不可忽视。通过体细胞核移植，我们最终获得了对结核病抗性增强的转基因牛。结论：我们的结果有助于推动 CRISPR-Cas9 系统在农业中的应用。