内吞作用是成熟黏附连接中E-钙黏蛋白再分布所必需的

E-钙黏蛋白在上皮细胞之间的黏附连接中发挥着关键作用，但控制其组装、维持和从连接中分离的机制仍不完全清楚。特别是，目前尚不清楚连接中参与的E-钙黏蛋白的数量在多大程度上受到内吞作用的调节，或是受粘附键的分离和膜内的扩散钙黏蛋白池的再分布影响。为了确定成熟连接中的钙黏蛋白水平是由内吞、分离和膜扩散调节的，采用了一种新的方法，结合了激光诱导荧光漂白（FRAP）和快速三维宽场荧光显微镜，对E-钙黏蛋白的动态进行了定量分析。荧光恢复的图像分析表明，大多数E-钙黏蛋白并不在成熟连接沿膜扩散，而是遵循一个由内吞作用速率限制的一阶转化过程。在MCF7或MDCK细胞的汇合培养中，稳定表达的EGFP-E-钙黏蛋白以空间均匀的动力学迅速回收（在MCF7中为50秒，在MDCK中为4分钟）。此外，当通过dynasore或MiTMAB药理学阻断内吞作用时，未观察到荧光恢复，表明没有发生内吞独立的膜再分布。我们的数据表明，参与成熟连接的E-钙黏蛋白分子的膜再分布需要内吞作用和随后的外吐，并得出这样的观点：参与连接的E-钙黏蛋白不会直接回归到自由膜扩散中。我们的结果表明，内吞效率与连接处的钙黏蛋白介导的力之间可能存在直接的机械耦合，这有助于调节细胞间粘附并局部稳定上皮组织。