Escherichia coli में विलोपन और जीन प्रतिस्थापन उत्पन्न करने के लिए नई विधि

हम Escherichia coli में जीन प्रतिस्थापन और विलोपन उत्पन्न करने के लिए एक विधि का वर्णन करते हैं। यह तकनीक सरल और तेज है और इसे अधिकांश जीनों पर लागू किया जा सकता है, यहां तक कि उन जीनों पर भी जो आवश्यक हैं। इस विधि को अद्वितीय और विशेष रूप से प्रभावी बनाने वाले तत्वों में से एक यह है कि यह जीन प्रतिस्थापन को सरल बनाने के लिए तापमान-संवेदनशील pSC101 रिप्लिकॉन का उपयोग करती है। यह विधि क्रोमोसोम पर मौजूद एक जीन और एक प्लास्मिड पर मौजूद समरूप अनुक्रमों के बीच समरूप पुनः संयोजन द्वारा संचालित होती है, जो DNA पुनरावृत्ति के लिए तापमान संवेदनशील है। इस प्रकार, उपयुक्त मेज़बान में प्लास्मिड के परिवर्तन के बाद, क्रोमोसोम में प्लास्मिड के एकीकरण के लिए 44 डिग्री सेल्सियस पर चयन करना संभव है। 30 डिग्री सेल्सियस पर इन संयोजनों की आगे की वृद्धि दूसरे पुनः संयोजन की घटना की ओर ले जाती है, जिसके परिणामस्वरूप उनका समाधान होता है। इस दूसरे पुनः संयोजन की घटना के स्थान के आधार पर, क्रोमोसोम या तो जीन प्रतिस्थापन से गुजरता है या जीन की मूल प्रति को बनाए रखता है। यह प्रक्रिया प्लास्मिड से क्रोमोसोम में एक एलील के स्थानांतरण को प्रभावित करने या किसी क्रोमोसोमल एलील को प्लास्मिड पर पुनः प्राप्त करने के लिए भी इस्तेमाल की जा सकती है। चूंकि हल किया गया प्लास्मिड चयन द्वारा बनाए रखा जा सकता है, यह तकनीक आवश्यक जीनों के विलोपनों को उत्पन्न करने के लिए उपयोग की जा सकती है।