Erforderlichkeit von hitzelabilen cytoplasmic protein Faktoren für die posttranslationalen Translokation von OmpA-Proteinvorläufern in Escherichia coli Membranvesikel

Die Beteiligung möglicher cytoplasmic Faktoren an der ATP-abhängigen posttranslationalen Translokation von Proteinen in Escherichia coli Membranvesikel wurde untersucht. Der Vorläufer des OmpA-Proteins wurde durch DEAE-Cellulose-Chromatographie teilweise gereinigt, und seine Translokation erwies sich als abhängig von Material aus der löslichen cytoplasmatischen Fraktion. Der fraktionierte aktive cytoplasmatische Translokationsfaktor (CTF) war proteasempfindlich, mikroko-nuklease-resistent, N-Ethylmaleimid-resistent und hitzelabil. Die Hitzesensitivität des CTF erlaubte seine spezifische und bevorzugte Inaktivierung in dem Rohvorläufer-Synthesemischung, was ein einfaches und schnelles Testverfahren für den Faktor während der Reinigung bot. Zwei aktive Fraktionen wurden bei weiterer Fraktionierung nachgewiesen: die Hauptfraktion war etwa 8S in der Saccharosegradientenzentrifugation und 120 Kilodalton durch Sephadexfiltration, während die andere etwa 4S und 60 Kilodalton in der Saccharosegradientenzentrifugation und durch Sephadexfiltration war. Die aktiven Fraktionen konnten auch durch DEAE-Sepharose-Chromatographie fraktioniert werden. Diese CTFs scheinen sich offensichtlich von dem zuvor berichteten 12S Exportfaktor (M. Müller und G. Blobel, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:7737-7741, 1984) zu unterscheiden.