Verwendung von Hydrazin zur Freisetzung von intakten und unreduzierten N- und O-verknüpften Oligosacchariden aus Glykoproteinen

Die Verwendung von Hydrazin zur Freisetzung unreduzierter N- und O-verknüpfter Oligosaccharide aus Glykoproteinen wurde unter Verwendung mehrerer "Standard"-Glykoproteine mit zuvor definierter Glykosylierung untersucht. Es wurde gezeigt, dass die Hydrazinolyse verwendet werden kann, um intakte N- und O-verknüpfte Oligosaccharide in unreduzierter Form freizusetzen. Die Freisetzung der O-verknüpften Oligosaccharide erfolgt mit einer geringeren Temperaturabhängigkeit als die Freisetzung der N-verknüpften Oligosaccharide, und die kinetischen Parameter, die die Freisetzung von Oligosacchariden aus diesen Standard-Glykoproteinen steuern, wurden bestimmt. Diese Parameter ermöglichen eine Definition der Reaktionsbedingungen, unter denen anhydride Hydrazinolyse verwendet werden kann, um selektiv O-verknüpfte Oligosaccharide (60 °C, 5 h) oder sowohl N- als auch O-verknüpfte Oligosaccharide (95 °C, 4 h) in hoher Ausbeute (> 85 %) aus allen untersuchten Glykoproteinen (n = 11) freizusetzen. Unter diesen Reaktionsbedingungen sind die recycelten N- und O-verknüpften Oligosaccharide strukturell intakt (wie durch 600-MHz 1H-NMR, Laser-Desorptions-Massenspektrometrie, HPAEC-PAD, Gel-Filtration und Glykosidase-Digestion beurteilt), mit möglichen Ausnahmen bestimmter N- und O-Acylsubstituenten der Neuraminsäure. Diese Verwendung von milder Hydrazinolyse erlaubt daher sowohl die gleichzeitige als auch die sequenzielle chemische Freisetzung von O- und N-verknüpften Oligosacchariden aus Glykoproteinen in ihrer intakten unreduzierten Form.