Rekombinante Genome, die Chloramphenicol-Acetyltransferase in Säugetierzellen exprimieren.

Wir haben eine Reihe von rekombinanten Genomen konstruiert, die die Expression des Enzyms Chloramphenicol-Acetyltransferase (CAT) in Säugetierzellen lenkten. Das Prototyp-Rekombinant in dieser Serie, pSV2-cat, bestand aus dem Beta-Laktamase-Gen und dem Replikationsursprung von pBR322, gekoppelt an einen frühen Transkriptionsbereich des Simianvirus 40 (SV40), in den CAT-codierende Sequenzen eingefügt wurden. In den ersten 48 Stunden nach der Einführung von pSV2-cat-DNA in die Nierenzellen von afrikanischen grünen Affen (CV-1) akkumulierten messbare Mengen an CAT. Da die endogene CAT-Aktivität in CV-1 oder anderen Säugetierzellen nicht vorhanden ist und schnelle, empfindliche Tests zur Messung der CAT-Aktivität verfügbar sind, boten diese Rekombinanten ein einzigartig praktisches System zur Überwachung der Expression von fremden DNA in Gewebekulturen. Um die Nützlichkeit dieses Systems zu demonstrieren, konstruierten wir Derivate von pSV2-cat, von denen ein Teil oder das gesamte SV40-Promotorregion entfernt wurde. Die Deletion einer Kopie der 72-Basenpaar-Wiederholungssequenz im SV40-Promotor verursachte keinen signifikanten Rückgang der CAT-Synthese in den Nierenzellen von Affen (CV-1); jedoch reduzierte eine zusätzliche Deletion von 50 Basenpaaren aus der zweiten Kopie der Wiederholungen die CAT-Synthese auf 11 % ihres Niveaus im Wildtyp. Wir konstruierten auch ein rekombinantes pSV0-cat, bei dem die gesamte SV40-Promotorregion entfernt und eine einzigartige HindIII-Stelle zur Einspeisung anderer Promotorsequenzen ersetzt wurde.