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Les vecteurs lentiviraux (LVs) sont des outils puissants pour l'expression des transgènes in vivo et in vitro. Cependant, la construction des LVs est de faible efficacité, en raison de leur grande taille et du manque de sites de clonage appropriés. Par conséquent, il est crucial de développer des stratégies efficaces pour le clonage des LVs. Dans cette étude, nous avons rapporté une stratégie combinatoire pour construire efficacement des LVs en utilisant des gènes EGFP, hPlk2 de type sauvage (WT) et mutants comme inserts. Tout d'abord, une mutagenèse dirigée par site (SDM) a été réalisée pour créer un site BamH I pour les inserts ; deuxièmement, le LV pWPI a été déphosphorylé après digestion par BamH I ; enfin, les quantités et les rapports de l'ADN de l'insert et du vecteur ont été optimisés pour augmenter la ligation monomérique. Nos résultats ont montré que le pourcentage total de clones positifs était d'environ 48 % ± 7,6 %. En utilisant cette méthode, presque tous les vecteurs pouvaient être construits à travers deux ou trois minipreps. Par conséquent, notre étude a fourni une méthode efficace pour construire des vecteurs de grande taille.
Zhang et al. (Tue,) ont étudié cette question.