PMT1, das Gen für ein Schlüsselenzym der Protein-O-Glykosylierung in Saccharomyces cerevisiae.

Das integrale endoplasmatische Retikulum-Membranprotein, das die initiale Reaktion der Protein-O-Glykosylierung in Saccharomyces cerevisiae katalysiert, wurde bis zur Homogenität gereinigt. Das 92-kDa N-glykosylierte Protein überträgt Mannose-Reste von Dolichylphosphat-D-Mannose auf spezifische Serin/Threonin-Reste von Proteinen, die in den sekretorischen Weg eintreten. Diese Art der Mannosyltransferreaktion wurde bisher nur in Pilzzellen beobachtet. Oligonukleotide, die von Peptidsequenzen der Transferase abgeleitet sind, wurden verwendet, um eine genomische Hefebibliothek zu screenen. Ein Klon wurde isoliert, der einen offenen Leserahmen von 2451 bp enthält, der einem mRNA-Transkript von 3 kb entspricht. Das vorhergesagte Protein besteht aus 817 Aminosäuren, einschließlich dreier potenzieller N-Glykosylierungsstellen. Das Hydropathie-Diagramm zeigt eine dreiteilige Struktur des Proteins: ein aminoterminales Drittel und ein carboxylterminales Drittel, beide mit mehreren potenziellen transmembranen Helices, und einen zentralen hydrophilen Teil. Die Expression des Klons in Escherichia coli führte zu einer Mannosyltransferase-Aktivität. Die Genzerstörung führte zu einem vollständigen Verlust der in vitro Mannosyltransferase-Aktivität von Dolichylphosphat-D-Mannose zu einem Peptid, das als Akzeptor im enzymatischen Assay verwendet wurde. In vivo wurde jedoch beobachtet, dass die Protein-O-Mannosylierung im Disruptanten nur auf etwa 40-50% gesenkt wurde, was auf die Existenz einer zusätzlichen Transferase hinweist, die im in vitro Enzymassay nicht gemessen wurde.