培養および自然発生（非培養）牛大動脈内皮細胞からの微粒子内皮由来弛緩因子合成酵素の精製と特性評価。

内皮由来弛緩因子の合成を担う微粒子酵素が、培養および自然発生（非培養）牛大動脈内皮細胞から精製された。アデノシン2′,5′-ビスリン酸をSepharoseに結合させたアフィニティクロマトグラフィーとその後のSuperose 6ゲル濾過クロマトグラフィーによる可溶化された微粒子酵素調製物の精製により、変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動後に約135 kDaに相当する単一のタンパク質バンドが得られた。さまざまな分画での酵素活性は、ラット胎児肺線維芽細胞（RFL-6細胞）の可溶性グアニル酸シクラーゼに対する刺激効果、L-アルギニンからのL-シトルリンの形成、亜硝酸塩/硝酸塩の生成の測定、および内皮を除去した血管ストリップでのバイオアッセイによって測定された。内皮由来弛緩因子合成酵素は、培養牛大動脈内皮細胞の粗微粒子分画から3419倍精製され、回収率は12%であった（RFL-6アッセイ）。精製された内皮由来弛緩因子合成酵素は、完全な活性に必要なL-アルギニン、NADPH、Ca2+、カルモジュリン、5,6,7,8-テトラヒドロビオプテリンを必要とした。