高效全长cDNA克隆

目前使用的cDNA克隆方法普遍存在的一个难题是获得包含相应mRNA完整核苷酸序列的cDNA片段。这里描述的克隆程序减轻了这个缺点。在每微克兔红细胞mRNA中获得的10^5个质粒-cDNA重组体中，约10%含有完整的α或β-球蛋白mRNA序列，至少30%到50%，但很可能更多，包含整个球蛋白编码区。我们将全长或几乎全长cDNA的高效克隆归因于(i) 质粒DNA载体本身作为第一链和第二链cDNA合成的引物，(ii) 产品未经过任何核酸酶处理，以及(iii) 程序中的某一步骤促使优先克隆具有全长cDNA的重组体，而不是截短的cDNA。