Liens croisés photochimiques entre les sous-unités de troponine squelettique de lapin. Interactions troponine I-troponine T.

La sonde photoaffinité hétérobifonctionnelle, AGTC (N-(4-azidobenzoyl-2-3Hglycyl)-S-(2-thiopyridyl) cystéine), a été attachée aux cystéines 48 et 64 de la troponine I pour déterminer quel composant de la troponine squelettique de lapin était à proximité de ces cystéines. Le complexe de troponine reconstitué (TnI CM marqué AGC, TnT et TnC) a été photolyse et séparé en utilisant la chromatographie DEAE-Sephadex en présence de 8 M d'urée et en l'absence d'agent réducteur. Les mesures de radioactivité ont indiqué que 12 % du réactif de liaison a réagi avec le solvant et 88 % avec la protéine. Le pourcentage de radiomarque trouvé dans les complexes TnI, TnI-TnT et TnI-TnC était de 35, 55 et 10 %, respectivement. Ces résultats ont montré que TnT et TnC sont tous deux situés à moins de 14 Å d'une ou des deux cystéines 48 et 64 de TnI. Parmi le radiomarque total trouvé dans TnT, 33 et 23 % ont été trouvés dans les deux fragments de bromure de cyanogène, CB4 (résidus 176-230) et CB2 (résidus 71-151). L'interprétation la plus probable des résultats de liaison croisée est qu'un des sites d'interaction entre TnI et TnT est une interaction ionique impliquant la région autour des cystéines 48 et 64 de TnI (résidus 28-82) avec la région CB5 de TnT (résidus 135-185).