Rituximab vermittelt den Verlust von CD19 auf B-Zellen in Abwesenheit des Zelltods

ZIEL: Evaluierung des Verlusts des B-Zell-spezifischen Markers CD19 nach Zugabe von Rituximab (RTX) zu Blut von gesunden Spendern und Bestimmung der Rolle der komplementvermittelten Zytotoxizität in diesen Zellen. METHODEN: Vollblut und periphere mononukleäre Blutzellen (PBMCs) von gesunden Spendern wurden hinsichtlich des Verlusts von CD19 in Gegenwart von RTX mit Hilfe von Durchflusszytometrie untersucht. Der Effekt von Komplement auf den Verlust von CD19 wurde unter Verwendung von serumfreien Medien, C3- und C5-defizienten Serum sowie einem C5-blockierenden Antikörper untersucht. Hinweise auf den Zelltod von B-Zellen wurden durch Messung der Messenger-RNA (mRNA) -Spiegel sowie durch Durchflusszytometrie evaluiert. Der Transfer des CD19-Antigens auf Monozyten und Neutrophile wurde durch Durchflusszytometrie und konfokale Mikroskopie untersucht. ERGEBNISSE: RTX führte zu einem schnellen Rückgang der CD19-Zahl (Durchschnitt 51%; n = 37) in PBMCs. Diese Reduktion trat in Abwesenheit von Komplement auf. Trotz des Rückgangs der CD19-Expression trat kein Zelltod der B-Zellen auf, wie durch fehlende Veränderungen der CD19- oder CD20-mRNA-Spiegel und fehlende Änderungen der CD19-Spiegel durch intrazelluläre Färbung und die Verwendung von Vitalitätsfarbstoffen belegt. Das CD19-Antigen wurde nachgewiesen, dass es in Fc-abhängiger Weise auf Monozyten und Neutrophile übertragen wird. SCHLUSSFOLGERUNG: Unsere Ergebnisse zeigen, dass die Zugabe von RTX zu PBMCs gesunder Spender in vitro zu einem komplementunabhängigen Verlust von CD19 führt, ohne den Zelltod der B-Zellen zu verursachen. CD19 wird während der Rasur des RTX-CD20-Komplexes in fc-abhängiger Weise von B-Zellen auf Monozyten und Neutrophile übertragen. Diese Daten legen nahe, dass die Überwachung der Wirkung von RTX durch Messung der CD19+ Zellzahl durch diese Aktivität beeinträchtigt sein könnte.