Effiziente Erholung von durch ENU induzierten Mutationen aus der Keimbahn von Zebrafischen.

Wir haben die Effizienz untersucht, mit der zwei chemische Mutagene, Ethylmethansulfonat (EMS) und N-Ethyl-N-nitrosourethan (ENU), Mutationen in verschiedenen Stadien der Spermatogenese bei Zebrafischen (Brachydanio rerio) induzieren können. Sowohl EMS als auch ENU induzierten Mutationen in hohen Raten in post-meiotischen Keimzellen, wie durch die Inzidenz mosaikartiger F1-Nachkommen für die Albino-Mutation angezeigt. Bei vor-meiotischen Keimzellen wurde jedoch nur ENU als effektives Mutagen identifiziert, was durch die Häufigkeiten nicht-mosaikartiger mutantischer Nachkommen an vier verschiedenen Pigmentationsloci angezeigt wird. Mehrere mutagene Regime, die sich entweder in der Anzahl der Behandlungen oder in der Konzentration von ENU unterschieden, wurden untersucht, um ein optimales Verhältnis zwischen Mutagenität und Toxizität zu erreichen. Für die beiden mutagensten Regime: 4 x 1 Stunde in 3 mM ENU und 6 x 1 Stunde in 3 mM ENU, betrug die minimale Schätzung der Frequenzen unabhängiger Mutationen pro Locus pro Gamete 0,9-1,3 x 10(-3). Wir zeigen, dass embryonale letale Mutationen, die mit ENU induziert wurden, an die Nachkommen weitergegeben wurden und dass sie in einem F2-Screen recuperiert werden konnten. Eine durchschnittliche Frequenz spezifischer Locusmutationen von 1,1 x 10(-3) entsprach ungefähr 1,7 embryonalen letalen Mutationen pro einzelner mutagenisierter Genom. Die hohen Mutationsraten, die mit ENU erreicht werden können, ermöglichen eine schnelle Identifizierung großer Mengen von Genen, die an verschiedenen Aspekten der Entwicklung von Zebrafischen beteiligt sind.