不同构象形式的纤溶酶原激活物抑制剂-1与玻连蛋白结合特性的表征

1型纤溶酶原激活物抑制剂（PAI-1）是纤溶酶原激活的主要生理性抑制剂，在血浆和细胞外基质中与粘附性糖蛋白玻连蛋白（Vn）相关联。在本研究中，我们使用固相结合实验检测了不同构象形式的 PAI-1 与天然及尿素纯化玻连蛋白的结合。这些结果表明，活性 PAI-1 与尿素纯化 Vn 结合的亲和力比与天然 Vn 高约 6 倍。相反，非活性形式的 PAI-1（潜伏型、弹性蛋白酶切割型、合成反应中心环肽退火型或与纤溶酶原激活物形成复合物）对两种形式吸附 Vn 的亲和力均显著降低，相对亲和力降低了 2 个数量级以上。在结构上，这些非活性构象与活性 PAI-1 的区别均在于有额外一条链插入到 β-折叠 A 中，这表明正是折叠 A 的重排导致了 Vn 亲和力的降低。观察结果支持了这一观点：与不发生 β-折叠 A 重排的 β-脱水胰蛋白酶结合的 PAI-1 未显示出这种亲和力下降，而与发生折叠 A 重排的 β-胰蛋白酶形成复合物的 PAI-1 对 Vn 的亲和力降低，类似于 PAI-1·纤溶酶原激活物复合物。这些数据共同表明，PAI-1 与 Vn 之间的相互作用取决于这两种蛋白质的构象状态，并提示 PAI-1 上的 Vn 结合位点对与抑制活性丧失相关的结构变化敏感。