来自c-src前mRNA的复杂内含子剪接增强子激活外显子纳入

小鼠c-src基因包含一个短的神经元特异性外显子N1。为了表征调控N1剪接的序列，我们使用了一种异源基因，该基因源自人类β-球蛋白基因，包含一个通常被剪接机制跳过的短内含子外显子。将src基因的各种片段插入到球蛋白底物中，以测量它们对测试外显子剪接的影响。这些克隆在神经元和非神经元细胞系中暂时表达，外显子纳入的水平通过引物延伸测量。来自N1外显子区域的几个序列诱导了异源外显子的剪接。最强的效果出现在N1外显子下游的内含子序列。该序列作为强剪接增强子起作用，当放置在下游内含子时激活测试外显子的剪接。增强子在神经元LA-N-5细胞中最强，但也在非神经元HEK293细胞中激活了剪接。缺失和连接扫描突变分析表明，增强子由多个较小的元件组成，这些元件必须协同作用。其中一个元件被识别为序列UGCAUG。这三个拷贝可以在LA-N-5神经母细胞瘤细胞中强烈激活测试外显子的剪接。这些src剪接增强子的组分元素显然也参与了其他短卡带外显子的剪接。