H 2 O 2 处理细胞中蛋白激酶 C δ 的磷酸化位点及其在体外被酪氨酸激酶激活

蛋白激酶 C delta (PKC delta) 通常由受体介导的水解肌醇磷脂产生的二酰基甘油激活。在用 H(2)O(2) 刺激细胞后，该酶发生酪氨酸磷酸化，并伴随酶活性的增加。这种激活似乎并不伴随其向膜的易位。在本研究中，通过使用前体扫描方法的质谱分析以及使用磷酸化位点特异性抗体的免疫印迹分析，鉴定出 H(2)O(2) 处理细胞中 PKC delta 的酪氨酸磷酸化位点为 Tyr-311、Tyr-332 和 Tyr-512。其中 Tyr-311 是主要的修饰位点。在一项体外研究中，非受体型酪氨酸激酶 Lck 在该位点的磷酸化增强了基础酶活性，并在二酰基甘油存在下提高了其最大反应速率。将 Tyr-311 突变为苯丙氨酸阻止了该最大活性的增加，但替换其他两个酪氨酸残基并未阻断这种效应。结果表明，调节结构域和催化结构域之间的 Tyr-311 磷酸化是响应 H(2)O(2) 产生活性 PKC delta 的关键步骤。