一种人类同源物的Schizosaccharomyces pombe rad1+检查点基因编码外切酶

在裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe中，rad1(+)基因是DNA损伤依赖性和DNA复制依赖性细胞周期检查点所必需的。我们鉴定出了一种人类同源物Hrad1，以及一种小鼠同源物Mrad1。已识别出两种具有不同开放阅读框的Hrad1替代剪接变体；一种编码长型Hrad1A，另一种因为N端截断而编码短型Hrad1B。Hrad1A在DNA水平上与S. pombe rad1+序列有60%的同一性，在氨基酸水平上有49%的同一性和72%的相似性。北方杂交分析表明，在睾丸和癌细胞系中表达水平升高。荧光原位杂交的染色体定位表明，Hrad1位于染色体5p13.2-13.3区域。该区域在人类多种癌症中存在杂合性丧失。Hrad1还与酿酒酵母RAD17和小麦黑腐病菌REC1蛋白共享同源性。REC1先前已被鉴定为具有3' --> 5'外切酶活性的C端结构域，对细胞周期检查点功能至关重要。我们表达并纯化了Hrad1A和Hrad1B的多组氨酸标签融合蛋白，结果显示HisHrad1A具有3' --> 5'外切酶活性，而HisHrad1B缺乏此活性。这两种蛋白的生物功能仍需进一步研究。