Expresión secuencial y función diferencial de múltiples moléculas de adhesión durante la formación de las capas corticales del cerebelo.

Hemos correlacionado los momentos de aparición de la molécula de adhesión celular neural (N-CAM), la molécula de adhesión celular neuron-glia (Ng-CAM) y la proteína de matriz extracelular, citoactina, durante el desarrollo de la corteza cerebelosa de pollo, y hemos demostrado que estas moléculas hacen diferentes contribuciones funcionales a la migración de las células granulares. La tinción inmunofluorescente mostró secuencias de expresión espaciotemporal distintas para cada molécula de adhesión. N-CAM estuvo presente en todo momento en todas las capas. Sin embargo, el gran polipéptido del dominio citoplasmático de N-CAM estuvo siempre ausente de la capa granular externa y se enriqueció en la capa molecular a medida que el desarrollo avanzaba. Ng-CAM comenzó a expresarse en las células granulares premigratorias justo antes de la migración y luego desapareció de los cuerpos celulares pero permaneció en las fibras paralelas. Citoactina, que es sintetizada por la glía y no por neuronas, apareció primero en un patrón moteado dentro de la capa granular externa y más tarde apareció en un patrón continuo a lo largo de la glía de Bergmann; también se enriqueció en la capa molecular. Después de establecer su orden de aparición, probamos las funciones separadas de estas moléculas de adhesión en la migración de células granulares al añadir anticuerpos específicos contra cada molécula a cultivos de explantes cerebelosos que habían sido etiquetados con timidina tritiada y luego midiendo la distribución diferencial de las células etiquetadas en las capas en formación. Anti-N-CAM mostró efectos marginales. En contraste, anti-Ng-CAM detuvo la mayoría de las células en la capa granular externa, mientras que anti-citoactina detuvo la mayoría de las células en la capa molecular. El análisis de la evolución temporal combinado con la adición secuencial de diferentes anticuerpos en diferentes órdenes mostró que anti-Ng-CAM tuvo un efecto importante en el período temprano (primeras 36 h en cultivo) y un efecto menor en la segunda parte del período de cultivo, mientras que anti-citoactina no tuvo esencialmente efecto en el tiempo anterior pero tuvo efectos importantes en un período posterior (18-72 h en cultivo). Las dos etapas principales de la migración de células granulares cerebelosas parecen ser afectadas diferencialmente por distintas moléculas de adhesión de diferentes orígenes celulares, mecanismos de unión y distribuciones generales. Los resultados indicaron que la modulación de la superficie celular local de las moléculas de adhesión de diferentes especificidades en etapas y sitios definidos es esencial para la formación de las capas corticales del cerebelo.