Trans-Regulation der Myogenin-Promotor-/Enhancer-Aktivität durch c-ski während der Skelettmuskel-Differenzierung: der C-Terminus des c-Ski-Proteins ist essentiell für die transkriptionelle regulatorische Aktivität in Myotuben

Das c-ski-Genprodukt ist ein Kernprotein mit myogenese-fördernden und transformierenden Aktivitäten. Wir haben die Effekte der c-ski-Transfektion auf die Promotor-/Enhancer-Aktivität der upstream-Regioin des Myogenin-Gens während der in vitro Myogenese mittels CAT-Reporter-Assay analysiert. Bei gleichzeitiger Transfektion mit c-ski in myogene C2C12-Zellen wurde die Promotor-/Enhancer-Aktivität in proliferierenden Zellen effizient unterdrückt, jedoch wurde der durch Myogenese induzierte Anstieg der Aktivität etwa zehnmal mehr (150-fach in den c-ski-transfizierten Zellen) potenziert als der gewöhnliche Anstieg (12-fach im Mock) 48 Stunden nach Induktion der Differenzierung. In nicht-myogenen 10T1/2-Zellen führte die c-ski-Transfektion zu einer anhaltenden Unterdrückung der Promotor-/Enhancer-Aktivität sowohl unter proliferierenden als auch unter wachstumsarrestierten (d.h. myogenese-induzierenden) Bedingungen. Somit scheint die ski-abhängige Potenzierung der transkriptionalen Aktivität des Myogenin-Gens spezifisch für die Myogenese zu sein. Der C-terminale Bereich (Aminosäuren 595-663) des c-Ski-Proteins war entscheidend für die potenzierende Aktivität in Myotuben. Andere Mitglieder der ski-Genfamilie, snoN und snoA, waren in der Transaktivierung ineffektiv, möglicherweise aufgrund des Defekts im entsprechenden C-terminalen Bereich. Das c-Ski-Protein zeigte nach in vitro Myogenese eine Mobilitätsverschiebung auf SDS/PAGE, die die Umwandlung der Aktivität von unterdrückend in Myoblasten zu potenzierend in Myotuben erklären könnte. Eine Deletionsanalyse der upstream-Region des Myogenin-Gens ergab, dass ein responsives Element für c-ski in Myotuben an einer bestimmten Stelle upstream der basalen Promotor-/Enhancer-Region lokalisiert ist.