通过CRISPR/Cas12a结合链置换扩增反应超灵敏检测miRNA

微小RNA（miRNA）是一种很有前景的生物标志物，可用于疾病（尤其是癌症）的诊断、监测和预后评估。现有的miRNA检测方法通常需要外部仪器进行定量信号输出，限制了其在即时检验（POC）环境中的实际应用。在此，我们提出了一种基于响应性水凝胶的距离生物传感器，结合CRISPR/Cas12a系统和靶标触发的链置换扩增（SDA）反应，用于miRNA的视觉定量和灵敏测量。靶标miRNA首先通过靶标触发的SDA反应转化为大量双链DNA（dsDNA）。随后，dsDNA产物触发CRISPR/Cas12a的附带切割活性，导致胰蛋白酶从磁珠（MBs）中释放出来。释放的胰蛋白酶可水解明胶，从而增加经明胶处理的滤纸的渗透性，在棉线上产生可见的距离信号。利用该系统，可以在无需任何仪器辅助的情况下直观地定量靶标miRNA的浓度，检测限达到6.28 pM。此外，还可以准确检测人血清样本和细胞裂解物中的靶标miRNA。由于具有简便、灵敏、特异和便携的特点，所提出的生物传感器为miRNA检测提供了一种新工具，在POC应用中具有广阔的前景。