Profilage quantitatif et large spectre des kinases dans des cellules vivantes pour évaluer l'effet de l'ATP intracellulaire sur l'engagement des cibles

Pour les inhibiteurs de kinases, la sélectivité des cibles intracellulaires est fondamentale pour le mécanisme pharmacologique. Bien qu'un certain nombre de techniques acellulaires aient été développées pour mesurer la liaison des kinases ou l'inhibition enzymatique, ces approches peuvent échouer à prédire avec précision l'engagement dans les cellules. Ici, nous rapportons l'application d'une technique de transfert d'énergie qui a permis la première approche à large spectre, basée sur l'équilibre, pour profiler quantitativement l'occupation des cibles et l'affinité des composés dans des cellules vivantes. En utilisant cette méthode, nous avons effectué un profilage de sélectivité pour des inhibiteurs de kinases cliniquement pertinents contre 178 kinases en pleine longueur, et une interrogation mécanistique des décalages de puissance observés entre l'analyse cellulaire et biochimique. Pour l'inhibiteur multikinase crizotinib, notre approche a prédit avec précision la puissance cellulaire et a révélé une meilleure sélectivité des cibles par rapport aux mesures biochimiques. En raison de l'ATP intracellulaire, un certain nombre de cibles présumées du crizotinib sont de manière inattendue disengagées dans des cellules vivantes à une dose de médicament cliniquement pertinente.