链球菌透明质酸合酶一级结构的免疫化学证实及重组酶合成高分子量产物

我们最近鉴定并克隆了来自A组Streptococci的透明质酸（HA）合酶基因hasA（DeAngelis, P.L., Papaconstantinou, J., & Weigel, P.H. (1993) J. Biol. Chem. 268, 19181-19184）。我们现已针对与推导蛋白部分相对应的合成肽制备了两种多克隆单特异性抗体。这两种抗体均能识别来自野生型Streptococcus pyogenes或含有质粒克隆基因的Escherichia coli中表观分子量为42,000的蛋白质。固定化的亲和纯化抗体以特异方式耗竭了链球菌膜功能性去污剂提取物中的HA合酶活性。固定化蛋白表现出HA合酶活性，且HasA是主要的结合多肽。在糖核苷酸特异性和多糖生成方面，重组HA合酶的表现与来自Streptococci的酶完全相同。仅天然糖核苷酸UDP-葡萄糖醛酸和UDP-N-乙酰氨基葡萄糖支持HA聚合。该重组酶以持续合成方式延伸HA，并在底物表观Km的3倍浓度下以约10-30个单糖/s的速率快速生成≥ 5 x 10(6) Da数量级的聚合物。