同型半胱氨酸诱导氧化应激的机制

高同型半胱氨酸血症会降低血管反应性，并与心血管疾病发病率和死亡率相关。然而，同型半胱氨酸（Hcy）增加氧化应激的致病机制尚未得到证实。本研究旨在探讨 Hcy 在心脏微血管内皮细胞（MVEC）中引发氧化应激并降低一氧化氮（NO）生物利用度的分子机制。将 MVEC 与 0-100 microM Hcy 一起培养 0-24 h。通过实时定量 RT-PCR 测量蛋白酶激活受体（PARs）、硫氧还蛋白、NADPH oxidase、内皮型 NO 合酶、诱导型 NO 合酶、神经元型 NO 合酶和二甲基精氨酸-二甲胺基水解酶（DDAH）的差异表达。使用荧光探针 2',7'-dichlorofluorescein diacetate 测量活性氧。在培养的 MVEC 中，通过 ELISA 测量不对称二甲基精氨酸（ADMA）水平，并通过 Griess 法测量 NO 水平。在 0-100 microM Hcy 和 0-24 h 的处理下，基础 NO 水平未发生改变。然而，Hcy 显著诱导了诱导型 NO 合酶并降低了内皮型 NO 合酶，而未改变神经元型 NO 合酶水平。ADMA 出现显著蓄积，部分原因是 Hcy 降低了 MVEC 中 DDAH 的表达。Hcy 显著增加了硝基酪氨酸的表达。结果表明，Hcy 激活 PAR-4，后者通过增加 NADPH oxidase 和降低硫氧还蛋白表达来诱导活性氧生成，并通过以下途径降低培养 MVEC 中的 NO 生物利用度：1）增加 NO2-酪氨酸形成，2）通过降低 DDAH 表达导致 ADMA 蓄积。