维生素D3对白介素-2基因的转录抑制：核激素受体直接抑制NFATp/AP-1复合物形成

1,25-二羟维生素D3（1,25(OH)2D3）作为维生素D3的活性代谢产物，抑制T淋巴细胞增殖，并与白介素2（IL-2）、干扰素-γ和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子mRNA水平的降低有关。我们在此报告，1,25(OH)2D3在Jurkat细胞中的抑制作用对环己酰亚胺（cycloheximide）具有抗性，表明这是通过维生素D3受体（VDR）对IL-2表达的直接转录抑制作用。因此，我们通过共转染Jurkat细胞与IL-2启动子/报告基因构建体和VDR过表达载体来研究维生素D3对活化IL-2表达的抑制作用，并通过DNA结合实验进行验证。我们划定了一个元件，使得受体在体外结合DNA，并且1,25(OH)2D3在体内的抑制作用集中在一个40个碱基对的短区域内，该区域包含一个重要的正调节元件NF-AT-1，该元件由T细胞特异性转录因子NFATp以及AP-1结合。VDR DNA结合突变体无法在体外结合此元件或在体内抑制；然而，VDR DNA结合域单独能够结合该元件，但也无法抑制IL-2表达。这些结果表明，VDR结合DNA是介导IL-2抑制所必需的，但不是充分条件。通过在体外结合部分纯化的蛋白质，我们观察到在加入VDR或VDR-视黄醇X受体时，结合的NFATp/AP-1-DNA复合物的丧失。添加顺序和脱结合速率的实验表明，VDR-视黄醇X受体异二聚体阻止NFATp/AP-1复合物形成，并随后与NF-AT-1元素稳定结合。这种核激素受体对IL-2基因转录激活因子的直接抑制可能为维生素衍生物作为强效免疫抑制剂的作用机制提供了解释。