用于解密GPCR信号通路的荧光素酶报告系统

G蛋白偶联受体（GPCR）代表了当前近一半疗法药物的靶标类，并且仍然是药物发现工作的重点。受体信号转导的复杂性持续演变。现在已知许多GPCR与多种G蛋白偶联，从而调控下游相应的信号通路。解密这种受体偶联将有助于我们理解GPCR的功能，最终开发药物候选分子。在这里，我们报道了使用改进型不稳定荧光素酶和各种响应元件（CRE、NFAT-RE、SRE和SRF-RE）开发的四种均匀生物发光报告测定。通过这些测定，可以测量主要的GPCR信号通路，包括cAMP的产生、细胞内Ca(2+)的动员、ERK/MAPK的活性以及小G蛋白RhoA的活性，均使用相同的报告测定格式。我们展示了如何通过这四种报告测定解密HEK293细胞中外源性的m(3)肌肉型胆碱受体和内源性的β(2)-肾上腺素受体的G蛋白激活谱。此外，我们还证明这些测定可以方便地用于激动剂和拮抗剂的效能排序，以及高通量筛选。