全血中血小板释放与聚集的相关性测定

我们利用双色免疫荧光和流式细胞术建立了一种同时测定全血中血小板活化和聚集的技术，以研究释放反应与聚集之间的关系。使用针对α颗粒膜蛋白GMP-140的特异性单克隆抗体测定释放反应，并使用针对血小板膜糖蛋白Ib（GPIb）的特异性单克隆抗体识别血小板和血小板聚集体。聚集体被鉴定为既表达一定水平的GPIb且体积大于静息单个血小板的颗粒。将抗凝全血与血小板激动剂共同孵育。在不同时间点取血样并立即用多聚甲醛固定。经乙二胺四乙酸抗凝的血液显示出血小板的进行性释放，但聚集极少或无聚集。然而，经柠檬酸盐或肝素抗凝的血液显示出相关的释放和聚集。肝素抗凝下的聚集程度大于柠檬酸盐。GPIb和GMP-140的表达随聚集体大小呈正比例增加。观察到的聚集体表观直径可达约20 microns。在延长孵育期间，二磷酸腺苷（ADP）诱导的聚集体发生进行性解聚。解聚后，GMP-140阴性的单个血小板比例增加，表明已释放和未释放的血小板均参与了聚集。佛波醇肉豆蔻酸酯（PMA）诱导的聚集体几乎没有发生解聚。我们在全血中观察到的血小板聚集体相对较小的体积和可逆性，可能与体内和体外循环中发生的现象相关。(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)