Identifikation und hochgradige Reinigung von insulinähnlichen Wachstumsfaktoren (nicht unterdrückbare insulinähnliche Aktivitäten und Somatomedine) aus menschlichem Plasma unter Verwendung endogener Bindungsproteine*

Die insulinähnlichen Wachstumsfaktoren (IGF) des menschlichen Serums, Somatomedine A und C sowie nicht unterdrückbare insulinähnliche Aktivitäten (NSILA) I und II sind nur in wenigen Laboren und in sehr begrenzter Menge verfügbar. In der vorliegenden Studie haben wir drei Peptide mit insulinähnlicher Aktivität identifiziert und zwei davon teilweise aus humanem Plasma mithilfe eines Hochrenditeverfahrens gereinigt, das die natürliche Affinität dieser Peptide zu ihren Bindungsprotein(en) nutzt. Humanplasma wurde bei neutralem pH ultrafiltriert, und die insulinähnlichen Wachstumsfaktoren, die mit hochmolekularen Bindungsprotein(en) assoziiert waren, wurden zurückgehalten, während Insulin und andere niedrigmolekulare Polypeptide eliminiert wurden. Das Retentat wurde angereichert, um die Peptide von ihren Bindungsprotein(en) zu dissoziieren, und die Ultrafiltration wurde wiederholt. Die dissoziierten Peptide wurden im Ultrafiltrat gesammelt. Eine weitere Reinigung erfolgte durch Gel-Filtration auf Sephadex G-75. Zwei Aktivitätsspitzen wurden beobachtet mit apparenten Molekulargewichten zwischen 6.000 und 10.000. Der stärker zurückgehaltene Peak, der 80 % der Aktivität ausmachte, wurde durch isoelektrische Fokussierung in zwei scharfe Banden aufgetrennt. Der Hauptanteil (75 %) hatte einen isoelektrischen Punkt von 6,5, ähnlich wie Somatomedin A; der geringere Anteil (25 %) hatte einen isoelektrischen Punkt von 8,3, ähnlich wie Somatomedin C und die kürzlich gereinigten NSILA I und II (auch bekannt als IGFs I und II). Beide Fraktionen waren in den Insulin- und IGF-Radiorezeptor-Assays aktiv. Die spezifischen Aktivitäten dieser Fraktionen betrugen 28 und 25 mU/ml insulinähnliche Aktivität, jeweils. Beide Fraktionen wiesen insulinähnliche und somatomedine Bioaktivitäten auf, aber nur die Fraktion mit pI 8,3 enthielt immunreaktives Somatomedin C. Die Gesamtreinigung betrug das 20.000-fache aus Plasma und die Erholung der Aktivität war nahezu vollständig. Dieses Reinigungsverfahren ermöglicht die Gewinnung erheblicher Mengen der insulinähnlichen Wachstumsfaktoren.