Enzymatic Characteristics of Acetolactate Synthase Mutant S638N in Brassica napus and Its Resistance to ALS Inhibitor Herbicides

摘要： 在对油菜抗咪唑啉酮类除草剂基因BnALS1R克隆与功能验证基础上, 为比较抗性基因编码的乙酰乳酸合酶突变体S638N酶学特性及其对ALS类除草剂抗性与野生型的差异, 构建基因原核表达载体, 在大肠杆菌中表达S638N和野生型的重组融合蛋白。SDS-PAGE和Western blot分析表明, S638N和野生型均能表达出约74 kD的特异性重组蛋白。纯化目的蛋白, 在不同温度和pH条件下, 测定S638N和野生型的酶活性。结果显示, 温度和pH对突变酶活性的影响与野生型相同, 表现为先升后降, 在37℃、pH 7.0条件下催化活性均最高。同时, 该突变酶的酶学动力学参数Km和Vmax与野生型没有显著差异, 其对3个辅助因子的响应曲线也与野生型类似, 缺少其中任何一个辅助因子均使突变酶S638N基本都没有活性。然而, 突变酶S638N对IMI类除草剂抗性显著高于野生型, 而对Su类除草剂敏感性和野生型相同。因此, 突变酶S638N具有对IMI类除草剂的专一抗性, 但未改变酶学反应特征。