In vitro culture of bovine egg fertilized either in vivo or in vitro

― Three-quarters of in vivo and one-third of in vitro fertilized bovine eggs reached blasto- cyst stage when cultured on tubal cell monolayers (TCM), but no hatching occurred in B2 medium supplemented with estrous cow serum.When after 3 days of culture on TCM, morulae were trans- ferred on endometrial cell monolayers (UCM), the same proportion of blastocysts was obtained and one-third of them hatched.* Correspond en ce and reprints.loppement jusqu'au stade blastocyste expansé mais jamais jusqu'à l'éclosion.A partir d'oeufs cultivés 3 j sur TCM, puis 4-5 j sur tapis de cellules utérines (UCM), nous avons obtenu respectivement 3i% d'éclosions pour les oeufs fécondés in vivo et 37% pour les ceufs fécondés in vitro, en mimant les conditions naturelles; ces valeurs sont significativement inférieures à celle observée in vivo (70° / ) dans des délais semblables.De plus, le nombre de cellules du bouton embryonnaire (ICM) de ces blastocystes éclos est significativement plus petit que celui des BI-8,5 (63 contre 87, Fig. la), alors que le nombre de cellules du trophoblaste n'est pas significativement différent (Fig. 16).Enfin, bien que des mitoses soient régulièrement présentes, le nombre de cellules picnotiques est significativement plus élevé que chez les BI-8,5.Le rôle joué par le TGF-/3 (transforming growth factor-/3) dans la différenciation de l'embryon de xénope, nous a conduit à rechercher si la présence de ce facteur de croissance dans le milieu de culture pouvait augmenter le nombre de cellules de l'ICM et réduire le taux de cellules picnotiques.Le TGF-/3 entraîne effectivement une augmentation hautement significative du nombre de cellules (120 contre 87).Le nombre de mitoses est également plus élevé, bien que non significativement (Fig. 2a).Malgré cela le nombre de cellules picnotiques demeure significativement plus important que chez les BI-8,5 (Tableaux 1/1 et IV).Par ailleurs, la présence de TGF-/3 élève le taux d'éclosion à des valeurs identiques à celle des 81-8,5 et permet l'éclosion sur TCM sans pas- sage sur UCM et ceci à un taux identique à celui des témoins BI-8,5.Ainsi TGF-/i permet d'augmenter spécifiquement le nombre de cellules de l'lCM, même au delà de la valeur normale, alors qu'il est sans effet significatif sur le trophoblaste.De plus, il permet un taux d'éclosion in vitro identique à celui observé in vivo 8,5 jours après la fécondation.La juxtaposition dans l'ICM de mitoses et de cellules pycnotiques mais en nombre plus élevé que dans les Bi 7 et 8,5 montre que le milieu utérin règle la taille de l'ICM en limitant le nombre de cellules qui dégénèrent, ce que nous n'avons pas réussi à ob- tenir dans notre système de culture.cultureblastocyste -vache ― éclosion -TGF-/3