Effects of acupuncture at different time points on the uterine immune microenvironment in rats with primary dysmenorrhea: A mechanistic study based on regulation of the Th17/Treg balance through the IL-6/JAK2/STAT3 pathway

摘要 目的 探讨不同时机针刺对原发性痛经 (Primary dysmenorrhea, PDM) 大鼠的治疗效应及其作用机制. 方法 40只SPF级雌性SD大鼠随机分为空白组,模型组,经前期组及经期组针刺组, 每组10只.除空白组外, 其余各组采用苯甲酸雌二醇联合缩宫素注射10天建立PDM模型.经前组于造模第7-9天针刺“关元 (CV 4) ”,“三阴交 (SP 6) ”, 经期组于第10天注射缩宫素后针刺, 空白组和模型组不予针刺.采用扭体反应评价疼痛指数;HE染色观察子宫病理形态;ELISA检测子宫组织中环氧合酶-2 (Cyclooxygenase-2, COX-2) ,前列腺素F2α (Prostaglandin F2α, PGF2α) ,前列腺素E2 (Prostaglandin E2, PGE2) 含量及血清中白细胞介素-1β (Interleukin-1β, IL-1β) ,白细胞介素-6 (Interleukin-6, IL-6) 及肿瘤坏死因子-α (Tumor necrosis factor-α, TNF-α) 含量;免疫荧光检测子宫组织CD86+/CD206+表达;转录组测序筛选相关通路;Western blot及RT-qPCR检测子宫组织Th17/Treg轴相关蛋白和mRNA表达. 结果 与空白组相比, 模型组扭体潜伏期缩短,扭体次数及评分增加 ( P< 0.01) , 子宫组织出现水肿,变性及腺体损伤;子宫组织中COX-2,PGF2α含量升高, PGE2含量下降 ( P< 0.001) , 血清中IL-1β,IL-6,TNF-α含量升高 ( P< 0.01) ;子宫组织CD86+表达增加, CD206+表达减弱, 白细胞介素-17 (Interleukin-17, IL-17) ,维甲酸相关孤儿受体γ (Retinoic acid-related orphan receptor γ, RORγt) 蛋白及mRNA表达升高, 白细胞介素-10 (Interleukin-10, IL-10) 及叉头样转录因子3 (Forkhead box P3, FOXP3) 蛋白及mRNA表达降低 ( P< 0.01) ;子宫组织IL-6,Janus激酶2 (Janus kinase 2, JAK2) ,信号转导及转录激活因子3 (Signal transducer and activator of transcription 3, STAT3) 及其磷酸化蛋白表达水平升高, 相关mRNA表达亦增加 ( P< 0.05) .与模型组相比较, 针刺干预后上述行为学,组织病理,生化,免疫及分子指标均有不同程度改善, 其中经前期针刺组改善作用优于经期针刺组 ( P< 0.05) .结合转录组测序结果进一步验证, 经前期针刺可通过抑制IL-6/JAK2/STAT3信号通路, 抑制Th17细胞分化并减少炎症因子释放, 从而调节子宫局部免疫稳态. 结论 不同时机针刺均可减轻PDM大鼠疼痛反应, 改善子宫组织病理损伤及炎症状态, 经前期针刺作用更为显著.其机制可能与抑制IL-6/JAK2/STAT3信号通路活化,减少Th17免疫平衡,降低前列腺素及炎症因子水平相关, 为针刺防治PDM及优化临床干预时机提供实验依据.