Key points are not available for this paper at this time.
啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是生产重组蛋白、燃料和化学品的成熟工业宿主。为了实现多个无标记过表达盒在S. cerevisiae基因组中的稳定整合，我们开发了载体工具包EasyClone-MarkerFree。通过CRISPR/Cas9，线性表达盒的整合在特定的基因组位点中得以实现。Cas9通过特定的导向RNA(gRNA)从一组gRNA辅助载体中被招募到染色体位置。使用我们的基因组工程载体套件，分别获得90-100%和60-70%的单重和三重插入定位效率。我们通过构建单倍体实验室菌株(CEN.PK113-7D)和二倍体工业菌株(Ethanol Red)来演示载体工具包的应用，以生产3-羟基丙酸，并测试了三种不同的乙酰辅酶A供给策略，每种策略需要过表达三到六个基因。在测试的策略中包括一种细菌细胞质丙酮酸脱氢酶复合体，该复合体在单次转化中被整合到基因组中。公开可用的EasyClone-MarkerFree载体套件能够方便且高度标准化的基因组工程，对从事具有有限标记的酵母底盘研究的研究人员尤其具有吸引力.
Jessop-Fabre等人(Wed,)研究了这个问题。