利用集成过表达文库对酿酒酵母中的激酶和转录因子的功能分析

摘要 激酶和转录因子（TFs）是重要信号通路的关键调节因子，其活性是许多基本细胞过程如细胞分裂、分化和发育正常功能的基础。激酶和转录因子剂量的变化通常与疾病相关，但对激酶和转录因子联合扰动所导致的细胞表型进行系统评估的研究尚未开展。我们采用反向遗传学方法研究了在芽殖酵母酿酒酵母中激酶和转录因子过表达（OE）的表型后果。我们构建了一组表达稳定整合的可诱导激酶和转录因子等位基因的菌株，并使用多种测定方法表征由转录因子和激酶过表达引起的表型。我们使用合成遗传阵列（SGA）方法检查239个功能获得（OE）等位基因的转录因子与六个功能丧失（LOF）和七个OE激酶等位基因之间的剂量依赖性遗传相互作用（GIs），前者识别合成剂量致死（SDL）相互作用，后者测试我们称之为“双剂量致死”（DDL）的遗传相互作用。我们确认了65个转录因子过表达等位基因与9个激酶等位基因之间的94个遗传相互作用。后续实验验证了基因相互作用对之间的调节关系（如Cdc28–Stb1和Pho85–Pdr1），表明涉及调节蛋白过表达等位基因的遗传相互作用研究将是获取新功能信息的重要来源。